熒光顯微鏡實驗總結 

用哪種固定方法 一般認為有兩種：冷acetone和4％PFA
我兩種都用過，感覺用4%PFA做前固定過夜后糖脫水效果是較好的，但是有點費時費力，經過比較，用冷acetone做后固定 5分鐘4攝氏度的效果也說得過去，也很方便省時。比較推薦！

blocking solution的配制和時間 我用的是5%serum 1％BSA 0.05%Tween PBS 室溫染色盒內1個小時，如果不放心可以兩個小時，但是一旦blocking了就要注意不能讓切片干燥，所以個人認為一個小時應該夠用了。(serum注意是和二抗同一種屬）

blocking solution的使用量 我用的是每一張100μl

切忌保持濕度 染色開始后切忌不能讓片子干燥了，一旦干燥了就會很糟糕，我也在這個地方吃了很多虧。。。
一抗的名稱 使用濃度 染色時間 保持濕度 遮光否
二抗的名稱 使用濃度 染色時間 保持濕度 遮光否

洗凈方法 一抗之后我一般洗三次 5分鐘換一次PBS 4攝氏度
二抗之后我一般洗四次 5分鐘換一次PBS 4攝氏度

＃封片劑干燥時間 較好是30分鐘以上，干燥后馬上觀察效果公認是較好的

＃熒光顯微鏡的使用 建議一定要跟著老師，前輩，多觀摩幾次之后再自己動手

簡單羅列了幾個個人認為需要提前做好提綱的關鍵詞
剛開始做的時候有挺多困難的
慢慢摸索也許會比較辛苦
但是一旦量變到質變之后再加上反復回頭看反復總結經驗，就會有提高

較后附上一張剛做的感覺還算清楚的大腸炎模型的切片中
colonic patch的部位， DC和Tcell 聚集的地方應該是在antigen presenting
藍色 上皮細胞
綠色 DC
紅色 T cell